食品大腸菌群檢驗紙片
1、原理及適用范圍
將乳糖膽鹽選擇性培養(yǎng)基和TTC顯色劑加載在紙片上，經(jīng)培養(yǎng)后能夠在紙片上生長并發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸的即為大腸菌群陽性，記錄每個稀釋度大腸菌群陽性紙片數(shù)，根據(jù)大腸菌群MPN表查出相應(yīng)的大腸菌群數(shù)。 食品大腸菌群檢驗紙片法與國標(biāo)法中的九管法相對應(yīng)，將原來幾步的試驗簡化為一步，時間由78h縮短為24h以內(nèi)，省去了制備培養(yǎng)基、消毒和培養(yǎng)器皿的清洗處理等大量輔助性工作，隨時可以打開包裝進(jìn)行抽樣檢測。 執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物檢驗大腸菌群計數(shù)MPN計數(shù)法（GB/T 4789.3--2010）。
適用于各類食品、飲料等樣品中大腸菌群的快速測定。
2、操作方法
2.1、樣品處理：
按無菌操作稱取樣品25g（或25mL）放入含有225mL滅菌磷酸緩沖液稀釋液（或生理鹽水）的取樣瓶或均質(zhì)杯中，經(jīng)充分振搖做成1：10的樣品勻液。樣品勻液的pH值應(yīng)在6.5～7.5之間，必要時用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸調(diào)節(jié)。用1mL滅菌吸管吸取1：10樣品勻液，注入含有9mL稀釋液的試管內(nèi)，振搖試管制成1：100的樣品勻液。根據(jù)對樣品污染狀況的估計，按上述操作，一次制成10倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次，換一支1mL無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過15min。
2.2、接種
2.2.1、選取兩個稀釋度進(jìn)行接種，普通食品一般采用1：10和1：100這兩個稀釋度，飲料采用原液和1：10兩個稀釋度。本品每份由三片大紙片（接10mL，袋中二片疊放算作一大片），六片小紙片（接1mL）組成。
2.2.2、用滅菌吸管吸取10mL 1：10樣品勻液加到含有大紙片的塑料袋中（相當(dāng)于接樣品1g），吸透后平放，做三個重復(fù)。再用1mL滅菌吸管吸取1mL同一稀釋度的樣品勻液加到含有小紙片的塑料袋中（相當(dāng)于接樣品0.1g），做三個重復(fù)。再另取一支1mL滅菌吸管吸取1mL 1：100樣品勻液加到含有小紙片的塑料袋中（相當(dāng)于接樣品0.01g），做三個重復(fù)。
2.3、培養(yǎng)：
將接種好的紙片（可疊放）放入36℃±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15～24h。
3、大腸菌群可能數(shù)（MPN）的報告
3.1 若紙片變黃或在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)為大腸菌群陽性紙片。紙片保持紫藍(lán)色不變或在紫藍(lán)色背景上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)，但周圍沒有黃色均為大腸菌群陰性紙片。
3.2 記錄每個稀釋度大腸菌群陽性紙片數(shù)，根據(jù)《食品飲料大腸菌群MPN表》查出相應(yīng)的大腸菌群數(shù)。
3.3 如接種的第一個梯度為原液，應(yīng)將表上查出的結(jié)果除以10。
4、食品大腸菌群檢驗紙片注意事項
新的國家標(biāo)準(zhǔn)所用的單位改為每克（或毫升）檢樣中大腸菌群可能數(shù)，標(biāo)準(zhǔn)的接種量為0.333g（mL），MPN表也是由此而設(shè)計。而使用本品的標(biāo)準(zhǔn)接種量為3.33g（mL），大紙片接種10mL 1：10樣品勻液相當(dāng)于1g樣品，因而表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低10倍。飲料樣品的接種量為33.3mL，大紙片接種10mL樣品原液，表內(nèi)數(shù)字應(yīng)降低100倍。
5、保存條件
本產(chǎn)品需存放在4℃～10℃冰箱中，保質(zhì)期為一年，鋁箔袋打開后,未用完的紙片要放回鋁箔袋中封好，放到冰箱中，一個月內(nèi)用完。在高濕度的環(huán)境中可能出現(xiàn)冷凝水，建議在拆封前將整包回溫至室溫。
食品、飲料大腸菌群（MPN）檢索表
陽性紙片數(shù) | MPN | 95%可信限 | 陽性紙片數(shù) | MPN | 95%可信限 | ||||||
0.10 | 0.01 | 0.001 | 下限 | 上限 | 0.10 | 0.01 | 0.001 | 下限 | 上限 | ||
0 0 0 0 | 0 0 1 1 | 0 1 0 1 | ＜3.0 3.0 3.0 6.1 | － 0.15 0.15 1.2 | 9.5 9.6 11 18 | 2 2 2 2 | 2 2 2 3 | 0 1 2 0 | 21 28 35 29 | 4.5 8.7 8.7 8.7 | 42 94 94 94 |
0 0 1 1 | 2 3 0 0 | 0 0 0 1 | 6.2 9.4 3.6 7.2 | 1.2 3.6 0.17 1.3 | 18 38 18 18 | 2 3 3 3 | 3 0 0 0 | 1 0 1 2 | 36 23 38 64 | 8.7 4.6 8.7 17 | 94 94 110 180 |
1 1 1 1 | 0 1 1 2 | 2 0 1 0 | 11 7.4 11 11 | 3.6 1.3 3.6 3.6 | 38 20 38 42 | 3 3 3 3 | 1 1 1 1 | 0 1 2 3 | 43 75 120 160 | 9 17 37 40 | 180 200 420 420 |
1 1 2 2 | 2 3 0 0 | 1 0 0 1 | 15 16 9.2 14 | 4.5 4.5 1.4 3.6 | 42 42 38 42 | 3 3 3 3 | 2 2 2 2 | 0 1 2 3 | 93 150 210 290 | 18 37 40 90 | 420 420 430 1000 |
2 2 2 2 | 0 1 1 1 | 2 0 1 2 | 20 15 20 27 | 4.5 3.7 4.5 8.7 | 42 42 42 94 | 3 3 3 3 | 3 3 3 3 | 0 1 2 3 | 240 460 1100 ＜1100 | 42 90 180 420 | 1000 2000 4100 － |
注1：本表采用3個稀釋度〔0.1g(或0.1ml)、0.01g（或0.01ml）、和0.001g（或0.001ml）〕，每個稀釋度接種3片。 注2：表內(nèi)所列檢樣量如改用1g(或1ml)、0.1g（或0.1ml）、和0.01g（或0.01ml）時，表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低10倍；如改用0.01g(或0.01ml)、0.001g（或0.001ml）、和0.0001g（或0.0001ml）時，則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)增高10倍，其余類 | |||||||||||
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